Rêzên genomîk ên piraniya vîrusan hatine zanîn.Lêpirsînên asîda nukleîk ku beşên kurt ên ADNyê ne ku ji bo hîbrîdîzekirina bi beşên ADN an RNA yên vîrusê yên temamker ve hatine çêkirin.Reaksiyona zincîra polîmerazê (PCR) ji bo tespîtkirina vîrusê teknîkek bikêrtir e.Rêbazên teşhîsa bilind ên di demên dawî de hatine pêşve xistin.
A. Teknîka hîbrîdîzasyona asîda nukleîk
Hîbrîdîzasyona asîda nukleîk, bi giranî di nav de blota başûr (başûr) û blota bakur (bakur), di warê tespîtkirina vîrusê de teknîkek nû ya bilez pêşkeftî ye.Aqilê ceribandina hîbrîdîzasyonê ev e ku meriv beşên kurt ên ADN-ê (bi navê "lêkolîn") bikar bîne ku ji bo hîbrîdîzekirina bi beşên DNA an RNA yên vîrusê yên temamker ve hatî çêkirin.Bi germkirin an tedawiya alkalînê, DNA an RNA-ya hedefa dubendî di nav rêzên yekane de têne veqetandin û dûv re li ser piştgiriyek hişk têne bêbandorkirin.Piştî wê, sondajê tê zêdekirin û bi ADN an RNA-ya armancê re hîbrîdîze kirin.Ji ber ku lêkolîn bi îzotop an nuclide ne-radyaktîf tê nîşankirin, DNA an RNA-ya armanc dikare bi otoradiografiyê an bi pergala biotin-avidin ve were tespît kirin.Ji ber ku piraniya genomên vîrusê hatine klonkirin û rêzkirin, ew dikarin bi karanîna rêzikên vîrus-taybet wekî lêkolînên di nimûneyê de werin tespît kirin.Heya nuha, rêbazên hîbrîdîzasyonê ev in: blot xalî, hîbrîdîzasyona li cîhê di hucreyan de, blotting DNA (DNA) (Blota Başûr) û ARN blot (RNA) (Blota Bakur).
Teknolojiya B.PCR
Di salên dawî de, rêzek teknîkên zêdekirina acîdên nukleî yên in vitro li ser bingeha PCR-ê hatine pêşve xistin, da ku vîrusên nehesas an neçandî ceribandin.PCR rêbazek e ku dikare rêzika DNA ya taybetî bi reaksiyona polîmerazê ya in vitro sentez bike.Pêvajoya PCR çerxeke germî ya ji sê gavan pêk tê: denaturasyon, helandin, û dirêjkirin Di germahiya bilind de (93℃~95℃), ADN-ya dubendî di du zincîrên DNA yên yekane de tê veqetandin;paşê li germahiya nizm (37℃~60℃), du primerên nukleotîdî yên sentezkirî li beşên ADN-yê yên temamker diherikin;dema ku di germahiya guncaw a ji bo enzîma Taq (72℃) de, senteza zincîreyên DNA yên nû ji destpêka 3'dawî dest pê dike û bi karanîna ADN-ya temamker wekî şablon û nukleotîdên yekane wekî materyal bikar tîne.Ji ber vê yekê piştî her zincîrekê, zincîrek DNA dikare bibe du zincîran.Dubarekirina vê pêvajoyê, her zincîra DNA ya ku di yek çerxê de hatî sentez kirin dikare di çerxa din de wekî şablon were bikar anîn, û hejmara zincîreyên ADN-ê di her çerxê de ducar dibe, ku tê vê wateyê ku hilberîna PCR di leza 2n de tê zêdekirin.Piştî 25 û 30 dewran, hilberîna PCR bi elektroforez tê nas kirin, û hilberên DNA yên taybetî di bin ronahiya UV (254nm) de têne dîtin.Ji bo berjewendiya wê ya taybetmendî, hesasiyet û rehetiya xwe, PCR di teşhîsa klînîkî ya gelek enfeksiyonên viral ên wekî HCV, HIV, CMV, û HPV de hatî pejirandin.Ji ber ku PCR pir hesas e, ew dikare DNA-ya vîrusê di asta fg de tespît bike, divê operasyon pir bi baldarî were meşandin da ku ji pozîtîfiya derewîn dûr nekevin.Wekî din, encama erênî ya di testa asîda nukleîk de nayê vê wateyê ku di nimûneyê de vîrusa enfeksiyonê ya zindî heye.
Bi serîlêdana berfireh a teknîka PCR, teknîk û rêbazên nû li ser bingeha teknîka PCR-ê ji bo mebestên ceribandina cihêreng têne pêşve xistin.Mînakî, PCR-ya mîqdar a dema rast dikare barkirina virusê tespît bike;in situ PCR ji bo naskirina enfeksiyona virusê di tevn an hucreyan de tê bikar anîn;PCR hêlîn dikare taybetmendiya PCR zêde bike.Di nav wan de, PCR-ya mîqdar a dema rast bi leztir pêşve çûye.Gelek teknîkên nû, wekî TaqMan sondaja hîdrolîzê, sondaya hîbrîdîzasyonê, û sondaya tîrêjê ya molekulî, di teknîka PCR-ya mîqdar a dema rast de, ku bi berfirehî di lêkolîna klînîkî de tê bikar anîn, hatine berhev kirin.Ji xeynî tespîtkirina barkirina vîrusê ya di şilava laşê nexweşan de, ev rêbaz dikare ji bo tespîtkirina mutant-toleransê jî were bikar anîn.Ji ber vê yekê, PCR-ya mîqdar a dema rast bi piranî di nirxandina bandora dermankirinê û çavdêriya tolerasyona derman de tê sepandin.
C. Tespîtkirina bilind a asîdên nukleîk ên vîrusê
Ji bo peydakirina hewcedariyên ji bo teşhîskirina bilez a nexweşiyên enfeksiyonê yên nû yên nûjen, awayên cûrbecûr vedîtina bi hilbera bilind, mîna çîpên DNA (DNA), hatine damezrandin.Ji bo çîpên ADNyê, sondajên taybetî têne sentez kirin û bi çîpên piçûk ên siliconê yên bi tîrêjek pir zêde ve têne girêdan da ku mîkrosaziya sondaya DNA (DNA) ya ku dikare bi nimûneyê re were hîbrîdîze kirin çêbike.Nîşana hîbrîdîzasyonê dikare bi mîkroskopa konfokal an skanera lazerê ve were wêne kirin û ji hêla komputerê ve bêtir were pêvajo kirin û daneyên mezin ên têkildarî genên cûda dikare were bidestxistin.Du cureyên çîpê DNA hene."Çîpa sentezê" wiha ye: Olîgonukleotîdên taybetî rasterast li ser çîpê têne sentez kirin.Ya din jî çîpa hewza DNA ye.Genên klonkirî an hilberên PCR bi rêkûpêk li ser slaytê têne çap kirin.Feydeya teknolojiya çîpê DNA-yê di heman demê de tespîtkirina hejmareke mezin a rêzikên DNA ye.Guhertoya herî dawî ya çîpê tespîtkirina pathogen dikare di carekê de zêdetirî 1700 vîrusên mirovan nas bike.Teknolojiya çîpê DNA pirsgirêkên rêbazên hîbrîdîzasyona asîda nukleîk a kevneşopî çareser kir û di teşhîskirina vîrus û lêkolîna epîdemîolojîk de serîlêdanên pir berfireh heye.
Dema şandinê: Kanûn-23-2020